能够生产异源抗体的转基因非人动物
2020-01-10

能够生产异源抗体的转基因非人动物

本发明涉及能够生产异源抗体的转基因非人动物和用于生产具有显著亲合力的人序列抗体的方法,所述抗体与人抗原结合。

cectaacggtgacaxtgaattcagtgTmrrramatcgacactgerggaamgaccetaggggggiatgaraggag

按照制造商提供的说明,用AppliedBioSystems寡核苷酸合成仪合成寡核苷酸。

实施例13

根据该方法,将转基因动物(如具有一对纯合的功能性破坏了的内源重链等位基因、一对纯合的功能性破坏了的内源轻链等位基因、至少一个拷贝的人免疫球蛋白轻链转基因和至少一个拷贝的人免疫球蛋白重链转基因的转基因小鼠)用预定的抗原如人抗原免疫接种。然后从发生免疫球蛋白基因重排的一个细胞或细胞群中收集或分离核酸,优选mRNA,确定编码免疫球蛋白重和/或轻链(特别是V片段)的核酸序列或其部分。用该序列资料作为人工基因序列的基础。

CTCACATTAATTGCGTTGCGCTCACTGCCCGCTTTCCAGTCGGGAAACCTGTCGTGC

用下列人IgG恒定区特异性的寡核苷酸筛选人基因组文库:

AGTACAAGTGCAAGGTCTCCAACAAAGCCCTCCCAGCCCCCATCGAGAAAACCATCT

\是能够参与与所选&供体区片段进行重组以便进行同种型转换的受体区片段,

将人免疫球蛋白重和轻链基因以小座位构建体,如HC2和KC-C04或YCA克隆如Jl.3P导入突变ES细胞。通过如电穿孔或用阳离子脂脂转染的技术来用人IgDNA转染ES细胞。为了选择已掺入人DNA的ES细胞,将选择性标记与构建体相连或将其与构建体一起共转染到ES细胞中。由于产生Ig基因失活的基因靶向事件,突变ES细胞含有新霉素磷酸转移酶(neo)基因,因此,可用不同的选择性标记如潮霉素磷酸转移酶(hyg)或嘌呤霉素N乙酰基转移酶(Pac)以便将人Ig基因导入ES细胞。

TCCGCCCCCCTGACGAGCATCACAAAAATCGACGCTCAAGTCAGAGGTGGCGAAACC

鉴定编码人IgGK杭-CD4杭体的核苷酸序歹Il

由于小鼠λ座位只占免疫球蛋白的5%,所以重链和/或κ轻链座位的失活就足够了。有3种方法来破坏这些中的每个座位,缺失J区、缺失J-C内含子增强子以及通过导入终止密码子而破坏恒定区编码序列。就DNA构建体的设计而言,最后这种方法是最直接的。除去μ基因破坏了B细胞的成熟,由此防止通过类型转换而转换成任何有功能的重链片段。下面列出使这些座位失效的方法。